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间充质干细胞如何培养?

作者:无锡耐思生命科技股份有限公司 2021-08-25T09:05 (访问量:13266)

什么是干细胞?
间充质干细胞是干细胞的一个研究分支。
干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞,它们可以不断地自我更新,并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞。干细胞是机体的起源细胞,是形成人体各种组织器官的始祖细胞。


什么是间充质干细胞?
间充质干细胞存在于多种组织(如骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等),具有多向分化潜力,非造血干细胞的成体干细胞。这类干细胞具有向多种间充质系列细胞(如成骨、成软骨及成脂肪细胞等)或非间充质系列细胞分化的潜能,并具有独特的细胞因子分泌功能,细胞模型被应用于增殖、移植和分化研究,以及体外的免疫反应的鉴定。

间充质干细胞的特性
1. 细胞具有贴壁依附性


2. 生态系统失衡特异性表面抗原表达-阳性和阴性的标记物


3. 多能分化,在体外可以分化成成骨,脂肪和软骨细胞。

间充质干细胞的用途
1.神经系统
间充质干细胞分泌组作为神经源性生态位调节剂
2.骨骼系统
间充质干细胞用于控制骨关节炎
3.肝脏
间充质干细胞可用于肝脏修复的治疗前景。
4.心脏
间充质干细胞来源的炎性成纤维细胞可介导衰老心脏的间质纤维化。
5. 肺
间充质干细胞来源的微泡在肺疾病中的作用。
6.肾脏
间充质干细胞与慢性肾动脉狭窄。
7.胰腺
使用间充质基质细胞制备替代β细胞
8. 肿瘤免疫治疗
改造间充质干细胞可为消除肿瘤生长提供持续浓度的高效特异性抗体。


间充质干细胞培养实验
试剂:Gibco基础培养基,Gibco胎牛血清,75%酒精
耗材:Nest 50ml离心管,Nest 10ml血清移液管,Nest T225透气盖细胞培养瓶 ,Nest 20μl吸头
设备:离心机,水浴锅,培养箱,移液枪,细胞计数仪,显微镜
准备:将胎牛血清按比例适当加入基础培养基中,配制成完全培养基。

实验步骤:
1. 从-196°C液氮罐取出1支间充质干细胞冻存管。

2. 即刻将冻存管置入37°C水浴锅中匀速摆动,持续一分钟左右,使直到管中只剩下最后一片结晶(注意:不要让水没过产品管)。

3. 用酒精擦拭管口。

4. 取20ml完全培养基加入离心管中,将融化好的细胞悬液加入到完全培养基中并充分混匀。



5. 取20ul混匀好的细胞悬液,用细胞计数仪计数。


6. 细胞悬液在1400rpm,室温条件下,离心5分钟,去上清。



7. 加入10-20ml完全培养基轻轻混匀细胞。

8. 每个T225细胞培养瓶中加入50ml完全培养基。



9. 按10000-15000个细胞/cm2接种细胞,平放摇匀使细胞分布均匀,在显微镜下观察细胞分布状态,放入37°C,5% CO2培养箱中培养。

 

 

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