快速实现菌落总数计数的好方法-分析方法-资讯-生物在线

快速实现菌落总数计数的好方法

作者:北京五洲东方科技发展有限公司 2011-03-03T00:00 (访问量:6783)

  螺旋接种是一种快速细菌接种方法。样品依据阿基米德螺旋为接种轨迹,以一递减的比率接种样品。通过旋转凸轮和转板,可使液体达到对数式或其它方式接种。接种后,菌落分布在螺旋轨迹上,并随半径的增加分布得越来越分散。利用按接种法则进行计数的栅格,自平板外周向中央对平皿上的菌落进行计数,即可得到样本中微生物的浓度。

 

  螺旋接种方法得到了国内外专业机构的广泛认可,该方法是美国FDA推荐的食品和化妆品中菌落计数的标准方法http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/LaboratoryMethods/BacteriologicalAnalyticalManualBAM/UCM063346,同时也是APHA和AOAC推荐的标准方法。在国内,“中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2098-2008中也推荐螺旋接种方法作为菌落计数的标准方法,得到了广大检验人员的肯定。
  螺旋接种的模式即递减的比率不同,可应用于不同的领域:
  指数模式(接种量:50μl):在接种过程中,样品量以指数模式递减。在旋转平板方法中用于菌落计数及单菌落分离。原始菌液浓度范围:4.0 ×102-4.0 ×105Cfu/ml
  此接种方法不同于传统的倾注式接种方法,省去了连续梯度稀释的繁琐步骤,可减少样本检测时培养皿、培养基等耗材3/4的使用数量,同时节省了实验人员的大量时间,从而得到质检、农检和商检等部门的广泛认可。
  此模式也可用于螺旋梯度终点测试即SGE试验中。利用spiral plater接种抗生素,形成径向抗生素连续浓度梯度。将菌液沿径向涂布于培养基上,可同时测试多个菌种。抗生素浓度由边缘至中心逐渐增大,可对不同菌种形成不同的抑制作用,利用专业软件可判断此种抗生素对于该菌种的最低抑菌浓度MIC。
  慢指数模式(接种量:50μl)接种量、模式与指数模式相同,速度稍慢。使用湿的平板时,选择缓慢指数模式,防止样品在向心力的作用下外溅。
原始菌液浓度范围:4.0 ×102-4.0 ×105 Cfu/ml
  比例模式(接种量:20μl)接种量与到中心的直线距离成比例递减,接种物浓度的范围因此比指数模式要窄得多。此接种模式有助于放大细菌数量在很小的梯度范围内对抗生素或诱变剂的反应。
  均一模式(接种量:20μl):在旋转过程中,样品以恒定的速率接种。可用于艾姆斯试验中接种沙门氏菌,研究两种微生物的相互作用,利用较稀原始菌液获得大量单菌落等。
  草坪模式(接种量:20μl)按照均一模式以恒定速率接种,但轨迹比均一模式密一倍,会在整个平板上产生均一、密集的生长。此接种模式用于在培养基上,均匀、精确的涂布样品,如用于KB纸片药敏测试或病毒空斑的研究。
  循环模式(接种量:50μl)模拟指数模式,但接种轨迹不是一条螺旋线,而是一系列圆圈,每组圆圈的接种浓度相同,主要是计数时更方便。
以上接种量均以90mm培养皿为准。
 
  螺旋接种方法是一种快速、精确、均匀的接种方法,主要用于微生物计数、诱变分析、药敏分析和单菌落分离。它能够为实验室节约耗材、降低成本,更重要的是节省精力和时间,结果较传统平板法更精确、重复性更好。
 
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