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一、细胞培养常见问题解答

1、如何选用培养基？

选择培养基没有一定标准，有几点建议可供参考：

（1）建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅文献，或在购买细胞株时咨询。

（2）实验单位惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。

（3）根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如贴壁细胞培养多选DMEM；进行悬浮细胞培养多用RPMI1640。

（4）用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。

2、solarbio常见培养基的添加成分？

（1）12100 DMEM高糖培养基：葡萄糖4.5g/L,含谷氨酰胺，HEPES，青霉素、链霉素，碳酸氢钠和酚红。不含丙酮酸钠

（2）31600 DMEM低糖培养基：葡萄糖1.0g/L,含谷氨酰胺，HEPES，青霉素、链霉素，丙酮酸钠，碳酸氢钠和酚红

（3）31800 RPMI 1640培养基：含**钙，谷氨酰胺，HEPES，青霉素、链霉素，碳酸氢钠和酚红，不含丙酮酸钠

（4）90013 DMEM高糖培养基：葡萄糖4.5g/L,含碳酸氢钠，不含谷氨酰胺，HEPES，青霉素、链霉素，丙酮酸钠和酚红。

（5）90022 RPMI 1640培养基：不含谷氨酰胺，HEPES，青霉素、链霉素，丙酮酸钠和酚红。

3、L－谷氨酰胺在细胞培养中的作用？稳定性如何？

合成培养基中都含有较大量的谷氨酰胺，其作用非常重要。 L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质合成和核酸代谢。

L－谷氨酰胺在溶液中不稳定，在配制各种培养液中都会补加一定量的谷氨酰胺。谷氨酰胺溶液应置于-20℃冰箱中保存，用前加入培养液。加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，应重新补加谷氨酰胺。

4、培养基或缓冲液中酚红的作用是什么？

酚红在培养基中被用来作为pH值的指示剂，中性时为红色，酸性时偏黄色，碱性时显紫色。

研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素），为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细 胞检测时，不使用加有酚红的培养基。     

5、在新鲜培养基中添加了血清和抗生素后，有效期是多长？

如果在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，建议在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

6、细胞培养基中碳酸氢钠以及HEPES作用？

培养基中使用了NaHCO3-CO2缓冲系统，并采用开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶，再通过稳定调节温箱中CO2浓度，与培养基中的NaHCO3处于平衡状态，从而调节培养基的PH值。

HEPES是一种非离子两性缓冲剂, 对细胞无毒性作用，在pH 7.2～7.4范围内具有较好的缓冲能力，能较长时间控制恒定的pH范围。在开放式培养条件下，观察细胞时培养基脱离了5%CO2环境，CO2逸出，pH迅速升高，若培养基中含有HEPES，可维持pH7.0左右。一般进行克隆化培养时要添加HEPES。使用终浓度为10～50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。

7、配置的培养基颜色变紫红色或者偏黄是什么原因？

配好的培养液变碱（变紫红）是正常的现象。暴露在空气中的培养液，因为大气中二氧化碳的浓度很低，培养液中的HCO3 -被渐渐耗掉，培养液的pH值也逐渐升高，变成了紫红色。如果培养基pH值偏碱的程度不大，可将装培养液的瓶口拧松，放置于二氧化碳培养箱中一段时间，让培养箱中的CO2进入培养液，pH值就可以纠正。如果pH值偏离的程度很大，可以通过添加少量无菌的H Cl 或者NaOH调节pH，便可以使用。

有时在加入血清后培养基颜色会发黄，加入血清后培养基PH会稍微下降，有个别批次的血清，可能发生过溶血因此色素比较高，加血清后培养液会变黄色。培养液宁酸勿碱，一般对细胞影响不大，可正常使用。偏离程度大者可自行调节pH。

8，使用胰蛋白酶时加入 E DTA的目的是什么？

胰蛋白酶能消化细胞-细胞，细胞-基质之间得连接从而使细胞从培养板上脱落下来并使细胞分散成单个细胞。钙镁离子是保持细胞和细胞之间相互连接所必需的，也是胰蛋白酶抑制剂，EDTA可以螯合钙镁离子，保持抑制胰蛋白酶的活性，有助于消化细胞。

9，细胞培养中的添加剂可以用DMSO和乙醇等有机溶剂配置吗？

在细胞培养中常常需要加入一些特定的添加剂或药物，这些试剂水溶性低，不能充分溶解，需要根据产品使用说明用DMSO或者无水乙醇来配置高浓度储存液。用DMSO和乙醇作为细胞培养添加剂的溶剂时要考虑到细胞的耐受性，一般培养基中要求其浓度不超过0.1%。

10、细胞培养污染如何让预防？

溶液处理，复苏或重新购置细胞，再培养。若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采用5～10 倍于常用量的抗生素冲击，加入高浓度抗生素后作用24～48h，再换入常规培养液，有时可能奏效。细胞培养中常用的抗生素及用量见下表。 

                                                             常用抗生素用量和效应