糖基化蛋白质的分析涉及蛋白质糖基化后结构和功能的研究。主要分析方法包括色谱分析、质谱分析、免疫学方法,及新兴技术如荧光标记和核磁共振。液相色谱-串联质谱通过酶解和色谱分离结合多重反应监测进行定量分析,提供结构和功能信息。 常见问题: Q1. 为什么糖基化蛋白质的分析如此重要? A: 糖基化蛋白质在
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GPC分子量分析测试,即凝胶渗透色谱分析测试,是一种以分子大小为基础的分离技术,通常用于测定高分子或聚合物样品的分子量分布、平均分子量以及聚合度等重要参数。在实验过程中,高分子样品在填充有均匀微小颗粒的色谱柱中以分子大小进行分离,小分子会在颗粒间隙中移动较慢,而大分子则通过路径较短,因此移动较快。通
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质谱法鉴定蛋白质基于质谱技术对蛋白质的质量、结构和化学修饰进行精确测定,从而鉴定蛋白质的身份和性质。在质谱法鉴定蛋白质过程中,通常先通过酶切、化学或物理方法将蛋白质分解为肽段,然后通过质谱对生成的肽段进行质量分析,得到肽段的质谱图。通过比对数据库,可以确定每个肽段的氨基酸序列,从而鉴定出原始蛋白质的
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糖基化分析涉及对特定分子(如蛋白质、脂质)的糖基化修饰研究,影响生理活动如免疫应答和信号转导。主要分为生化分析和分子生物学分析。 生化分析关注糖基化对蛋白质结构和功能的影响,方法包括二维电泳、质谱分析和免疫印迹,旨在检测、鉴定及定量糖基化蛋白质。分子生物学分析则关注糖基化在基因表达和信号转导中的作
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蛋白质序列测定可以确定蛋白质的氨基酸序列,这对于理解蛋白质结构、功能及其生物学角色至关重要。传统的蛋白质序列测定方法包括Edman降解法,它逐渐去除蛋白质的N末端氨基酸并在每一步中识别它。然而,这种方法时间消耗长,无法应用于大规模的样本。在现代实验室中,蛋白质质谱法(也称为质谱测序)被广泛应用于蛋白
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外泌体是细胞间通讯工具,含有蛋白质、脂质和RNA,其蛋白质组成在疾病状态下可能显著变化,因此被视为疾病标志物。常用的外泌体蛋白分析技术包括蛋白质质谱、免疫印迹和酶联免疫吸附实验,用于鉴定和量化特定蛋白质。 核心步骤包括样品准备、蛋白质分离、鉴定和定量,以及数据分析。样品准备涉及对生物样品进行离心、
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外泌体蛋白检测方法主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、质谱(MS)和蛋白质组学分析。ELISA利用特定抗体和标记物识别并定量检测外泌体中的特异性蛋白;质谱和蛋白质组学分析则通过高灵敏度设备分析外泌体的蛋白质组成。 流式细胞仪分析是另一种常见方法,能够同时检测多个蛋白标志并对单一外泌体进行分析。
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TMT(Tandem Mass Tag)定量蛋白组学分析通过同位素标记策略,实现多样本的同步定量。过程包括将蛋白样品酶解为肽段,使用TMT标记试剂标记后混合不同样本,再通过LC-MS/MS进行质谱分析。质谱结果能根据肽段和TMT标记的质量,对蛋白质表达进行相对或绝对定量。 TMT分析的优势在于高通
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目前,蛋白质定量测定主要方法包括Bradford法、Lowry法、BCA法、紫外吸收法和稳定同位素标记法。Bradford法因操作简便和高准确性而广受欢迎;Lowry法则以其高度灵敏和广泛测定范围著称。BCA法基于双重检测机制,具有高度准确性和重复性;紫外吸收法利用蛋白质中的芳香族氨基酸在特定波长的
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