人凋亡诱导因子(AIF)酶联免疫（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
药品名称：
通用名：人凋亡诱导因子(AIF)酶联免疫诊断试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆、或其它相关组织液中凋亡诱导因子(AIF)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人凋亡诱导因子(AIF)水平。用纯化的凋亡诱导
因子(AIF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入凋亡诱导因子
(AIF)，再与HRP标记的羊抗鼠受体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤
后加底物TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的
黄色。颜色的深浅和样品中的凋亡诱导因子(AIF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定
吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人凋亡诱导因子(AIF)含量。
试剂盒组成
1 20 倍浓缩洗涤液 30ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（18μg/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张  
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本处理及要求
1．血清、血浆、脑脊液、腹腔液标本可直接测定；
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
3．采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反
复冻融。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔中分别加标
准品 100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第一孔和第二
孔中先各取50μl弃掉；再各取50μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别
加标准品稀释液 50μl，混匀后，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第
六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到
第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第七、第
八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl，
混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl，浓度分别为
12μg/L，6μg/L ，3μg/L，.1.5μg/L，0.75μg/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样
品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。    
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此
重复 5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8.