产品信息
 
产品名称
产品编号
规格
价格（元）
促销价（元）
Hieff Clone® Zero TOPO-TA Simple Cloning Kit, MCS-Depleted
零背景TOPO-TA克隆试剂盒（不含MCS多克隆酶切位点）
10908ES20
20 T
625.00
530.00
 
产品描述
 
本试剂盒是利用拓扑异构酶(Topoisomerase)高效快速连接DNA片段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：1）快速，仅需 1-5 min即可完成连接反应。2）高效，无自连，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；3）操作简单，从连接到涂板仅需 15-20 min。操作过程省去冰浴、热激和1 h复苏。4）可连接长达5 kb目的产物；5）Hieff Clone® Zero TOPO-TA Simple Cloning Kit不含多克隆酶切位点(MCS)，在引入后续酶切位点进行酶切操作时，不会受到MCS位点的影响，从而增加酶切效率以及克隆成功率。
 
产品用途
 
A尾PCR产物的快速克隆；克隆后PCR产物的快速测序（使用M13F/M13R引物）。
 
产品组分
 
组分编号
组分名称
产品规格
10908ES20（20 T）
10908-A
pESI-T simple vector (30 ng/μL)
20 μL
10908-B
1 kb control insert (40 ng/μL)
5 μL
10908-C
10× Enhancer
20 μL
 
运输和保存方法
 
冰袋运输。-20℃保存，避免反复冻融。有效期一年。
 
注意事项
 
1）pESI-T simple vector插入位点两端不含多克隆酶切位点，需要在PCR设计引物时引入合适酶切位点。
2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅供科研用途！
 
使用方法
 
一、Control DNA片段的克隆实验
1）在无菌微量离心管中配制下列DNA溶液，以10 μL为例。
组分
用量
10 ´ Enhancer
1 μL
1 kb control insert (40 ng/μL)
1 μL
pESI-T simple vector (30 ng/μL)
1 μL
ddH2O
7 μL
2）混匀上述体系。于室温(20-30℃)反应5 min。
【注】：连接反应不可于冰上进行。室温下孵育时，不建议您超过5分钟；但是，如果您的PCR产物浓度较低或者您要克隆一个长片段，则可以适当延长孵育时间。
3）连接产物可直接转化或于-20℃保存。
4）全量10 μL加入100 μL感受态细胞，轻轻混匀，室温放置5 min。
【注】：a）也可取5 μL连接液，加入50 μL感受态细胞中（加入体积不超过感受态细胞体积的1/10)。
b）通常使用商品化的感受态细胞不需要冰浴和热休克，室温放置5 min便可获得足够多转化子，如果感受态细胞转化效率较低时，可以按照冰浴热激的标准程序进行。
5）加300-500 μL LB或者SOC培养基（不含抗生素），37℃ 180 rpm振荡培养10 min。
6）取200 μL菌液涂板（含氨苄抗性的LB或SOC固体培养基），培养过夜（如果预计转化子少，得到较多克隆，4000 rpm 离心1 min，吸弃掉部分上清，保留100 μL，轻弹悬浮菌体，取全部菌液涂板）。
 
二、一般DNA片段的克隆实验
所插入片段为利用常规Taq酶(Yeasen，Cat#10101-10106)或热启动型Taq酶(Yeasen，Cat#10732)扩增得到的含A尾产物，如产物无非特异性条带、引物二聚体可直接进行连接反应，否则建议胶回收后使用。
【注】：a）PCR产物不能磷酸化。
b）如扩增模板为质粒，模板质粒会在后续实验中引起假阳性，因此推荐PCR产物进行胶回收后连接。
1）按照下表配制连接体系（以10 μL为例）
组分
用量
10 ´ Enhancer
1 μL
pESI-T simple vector (30 ng/μL)
1 μL
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